Пилка для лобзика Makita B-23 100 шт (B-07749)
Почти за вековую историю существования японская компания Makita прекрасно зарекомендовала себя на мировом рынке. Электроинструменты, генераторы и садовая техника этого производителя пользуются популярностью у профессионалов и любителей, которые отдают предпочтение надежности, высокой эффективности и максимальному комфорту в работе.
Многие по привычке, выработанной вследствие наплыва китайских товаров сомнительного качества в 90-е годы прошлого века, до сих пор осторожно интересуются у продавцов о стране-изготовителе той или иной модели электроинструмента Макита и, услышав слово «Китай», отправляются восвояси с надеждой найти то же самое но с лейблом «made in…» где-нибудь в другом месте. И абсолютно зря. Дело в том, что на сегодняшний день предприятия концерна Makita рассредоточены по всему миру – в Японии, Германии, Румынии, Австрии, Великобритании, Америке, Бразилии и Китае. И производство распределено таким образом, что определенные модели выпускаются только на конкретных предприятиях.
Например, бесполезно искать в продаже перфоратор Makita HR2450, произведенный в Германии или Великобритании. Этот инструмент сходит только с конвейеров одного из двух китайских заводов, о чем свидетельствуют литеры «Y» или «K» в конце серийного номера на шильдике самого инструмента (упаковка и некоторые комплектующие могут быть от другого производителя).
Тот факт, что эта информация открыта, лишний раз подтверждает прозрачность экономической политики концерна Макита и ответственность за качество. Все новые технологии разрабатываются на родине бренда – в Японии, и совершенствуются на заводе в Оказаки, и только после этого под неусыпным контролем квалифицированных специалистов внедряются в производство на других предприятиях, в том числе и на китайских.
Что касается стандартов качества, то они едины для всей продукции Makita, независимо от географии производителя.
Все заводы имеют сертификаты, подтверждающие соответствие наличествующей системы управления качеством нормам ISO 9000:2000, направленным на удовлетворение интересов потребителей.
Таким образом, качество китайской Макиты, если только это не дешевая подделка, находится на одном уровне с японской, английской или, к примеру, немецкой. А чтобы исключить подделку, достаточно воспользоваться услугами официального дилера Makita. Например, услугами компании МакитаПро.
Пилки для лобзика Makita № B-23 (5 шт) A-85743
Пилки для лобзика Makita № B-23 (5 шт) A-85743 — цены, фото, описание, характеристики, купить в Нижнем Новгороде Главная / Принадлежности / Для электроинструмента / Для лобзиков / Пилки лобзиковые / Makita A-85743 №B-23
Список официальных сервисных мастерских ООО «Молоток»
Список сервисных мастерских Makita в других регионах находится здесь |
3-й Интернационал д.72
И.Вся информация на сайте носит справочный характер и не является публичной офертой, определяемой положениями Статьи 437(2) Гражданского кодекса РФ.
| ФГУП «ВНИИОФИ» | 22 |
| ФБУ «Тюменский ЦСМ» | 5 |
| ФБУ «Ростест-Москва» | 5 |
| ФБУ «ЦСМ Московской области» | 4 |
| ФГУП «ВНИИОФИ» | 3 |
| ФБУ «Государственный региональный центр стандартизации метрологии и испытаний в Красноярском крае» | 3 |
| ФБУ «РОСТЕСТ-МОСКВА» | 3 |
| ФБУ «Коми ЦСМ» | 3 |
| ФБУ «Амурский ЦСМ» | 2 |
| ФБУ «Марийский ЦСМ» | 2 |
| ФБУ «Костромской ЦСМ» | 2 |
| ФБУ «Карельский ЦСМ» | 2 |
| ФБУ «ЧУВАШСКИЙ ЦСМ» | 2 |
| ФБУ «ТЮМЕНСКИЙ ЦСМ» | 2 |
| ФБУ «Марийский ЦСМ» | 2 |
| ФБУ «КРАСНОЯРСКИЙ ЦСМ» | 2 |
| ФБУ «АСТРАХАНСКИЙ ЦСМ» | 1 |
| ФБУ «Забайкальский ЦСМ» | 1 |
| ФБУ «САХАЛИНСКИЙ ЦСМ» | 1 |
| ФБУ «КОМИ ЦСМ» | 1 |
| ФБУ «ЗАБАЙКАЛЬСКИЙ ЦСМ» | 1 |
| ФБУ «ДАГЕСТАНСКИЙ ЦСМ» | 1 |
| ФБУ «Чувашский ЦСМ» | 1 |
| ФБУ «ВОРОНЕЖСКИЙ ЦСМ» | 1 |
| ООО ПК «ТЭКСИ» | 1 |
Clever B-23.
Рентгеновский спектрометр c системой локального анализаТехнические характеристики
Пробы:
Твердые, порошковые, жидкие, нанесенные на поверхность или осажденные на фильтр.
Измерительная камера:
с радиационной защитой для анализа проб на воздухе, атмосфере гелия и в вакууме.
Максимальный размер образца:
диаметр 300 мм, высота 75 мм.
Автоматический сменщик образцов:
съемная платформа на 10 позиций, адаптеры для установки 40 мм и 30 мм кювет.
Источник рентгеновского излучения:
Рентгеновская трубка с Rh или Ag анодом, мощность 50 Вт, напряжение 50 кВ, ток 2000 µА.
Детектор:
SDD детектор с электроохлаждением Пельтье, площадь 25 мм², разрешение 140 эВ. пция для анализа от C.
Размер пятна анализа:
0.3−10 мм с шагом 0.1 мм.
Картирование распределения элементов:
разрешение 300 mм.
Устройство первичных фильтров:
8 управляемых компьютером фильтров.
Видеосистема:
цветная CCD видеокамера для позиционирования пробы для локального анализа, навигация по поверхности пробы при помощи указателя мыши.
Система позиционирования:
диапазон перемещения по Х — 90 мм, Y — 70 мм, точность 0.05 мм, скорость 50 мм/сек.
Вакуумная система:
двухступенчатый вакуумный насос.
Качественный анализ:
KLM-маркер; автоматическая идентификация пиков и их маркировка; генерация модельного спектра по заданному составу пробы; математическая обработка спектра методом наименьших квадратов; цифровая фильтрация; нормировка спектров; цифровое удаление фона; построение карты распределения элементов на поверхности образца.
Количественный анализ:
многоэлементная регрессия с коррекцией межэлементных влияний с использованием интенсивностей или концентраций; графики регрессии; альфа коррекция для уменьшения числа необходимых стандартных образцов; бесстандартный метод фундаментальных параметров.
Питание:
220 В, 0.4 кВт.
Габариты и вес:
50×60×40 см, 55 кг.
Обломки B-23 ‘Dragon Bomber’ — Макколл, Айдахо
Между деревьями и высокой травой у берега озера Лун в национальном лесу Пайетт в штате Айдахо находится обломки Douglas B-23 «Dragon Bomber», военного самолета, который никогда не участвовал в воздушных боях. Небольшой самолет потерпел крушение более 70 лет назад и с тех пор остается на своем лесном месте на берегу озера.
В конце января 1943 года восемь человек находились на борту бомбардировщика во время тренировочного задания. Хотя они должны были благополучно приземлиться в Такоме, штат Вашингтон, сильная снежная буря помешала их планам.Самолет начал тонуть, из-за множества тяжелых льдов он сломался во время полета в холодном воздухе.
Радио перестало работать, в результате чего экипаж был отрезан от внешнего контакта, находясь в ловушке в пределах разрушающегося транспортного средства. Мужчинам пришлось выбирать между прыжком с парашютом в заснеженную пустыню или попыткой приземлиться.
Пилот каким-то образом заметил озеро Лун через покрытое льдом лобовое стекло кабины и решил использовать его замерзшую поверхность в качестве отчаянной импровизированной взлетно-посадочной полосы.
Ему потребовалось две попытки, чтобы успешно довести самолет до земли. Когда бомбардировщик, наконец, ударился о лед, он пролетел по скользкой поверхности и скользнул через лес, наконец, остановившись примерно в 150 футах от берега озера. Деревья оторвали крылья от корпуса самолета.
К счастью, все восемь членов экипажа выжили, хотя один получил серьезные травмы ноги. Они провели дни, ютясь во временном убежище, которое они разрушили, зарывшись в снег и прикрыв ледяную лачугу частями разбитого самолета, столкнувшись с отрицательными температурами и нехваткой еды.В конце концов, трое из наиболее трудоспособных мужчин отправились за помощью.
Хотя военные разослали самолеты на поиски пропавших без вести членов, выжившие не были обнаружены до тех пор, пока пилот самолета, находившегося в отдаленной местности, не заметил крушение и не сообщил властям о своем открытии.
Спустя почти две недели пятеро мужчин, оставшихся на месте крушения, наконец, были спасены. Затем начались поиски троих, которые отправились в поисках помощи. В конечном итоге они были обнаружены после контакта с внешним миром на станции рейнджеров в Лейк-Форк, проведя две недели в походе на 40 миль по снегу глубиной по пояс.
Все, что осталось от покореженного самолета, все еще находится на месте крушения. Чтобы найти затонувшее судно, необходимо пройти через лес примерно в 10-мильный маршрут туда и обратно, который включает в себя несколько пересекающихся троп.
Дуглас Б-23 ДраконАмериканский средний бомбардировщик и фоторазведчик
В начале 1930-х гг. Дуглас был наиболее известен своим успешным авиалайнером с двумя двигателями DC-2. Так это было естественно что, когда их попросили сделать ставку на новый армейский средний бомбардировщик, они основали дизайн на DC-2 с более глубокий фюзеляж. А вот полученный B-18 Bolo оказался разочарованием, и Douglas предложил серьезный редизайн, используя более сильные крылья большего DC-3. Заказ на 38 самолетов новой конструкции Б-23, г. был размещен в 1938 году, а первый взлетел 27 июля 1939 года. B-23 имел максимальную скорость 66 миль в час быстрее, чем B-18, и установлен пулемет калибра .50 в остекленном хвосте. место наводчика, первого на американском бомбардировщике. Самолет также был предназначен для фоторазведки, и аэрофотоаппарат может быть установлен в нос. Несмотря на свои размеры, B-23 имел органы управления для
только один пилот, остальные члены экипажа являются бомбардиром (тогда называемым бомбардировщиком),
штурман, радист, оператор и наводчик. К сожалению для B-23, к 1941 г. Boeing B-17 продемонстрировал свои превосходные характеристики как бомбардировщик, и не более того. Дизайн Дугласа были построены. Некоторые B-23 использовались ограниченно в прибрежных патрулях, но многие были переоборудованы для использования в качестве транспорта и буксировки планеров или иным образом использовались в тренировках в качестве UC-67s. После войны многие В-23 были модифицированы как корпоративные самолеты, некоторые из которых перевозят до двенадцати пассажиров.Другие служили исследованиями самолетов, взятия проб воздуха и проведения атмосферных испытаний. Технические характеристики
|
Фотографии Билла Крампа. 
Различные члены экипажа служили
артиллеристы для трех пулеметов .30 калибра, когда это необходимо.
с. при 2400 об / минПоход к озеру Лун, месту крушения бомбардировщика недалеко от Макколла, Айдахо
СЕКУН Заманчиво пожаловаться после почти часа перехода вброд по озеру, перелезания через упавшие деревья, прыжков с камня на камень и царапания ногами о коряги.
Тогда вы вспомните, зачем вы здесь.
Эта история является эксклюзивной для подписчиковСемьдесят пять лет назад бомбардировщик B-23 Dragon разбился посреди зимы на южном берегу озера Лун в штате Айдахо. Все восемь человек на борту выжили — некоторые ждали спасения у самолета, а другие более двух недель путешествовали за помощью по незнакомой заснеженной местности.
Да, лучше держать эти жалобы при себе.
Бомбардировщику сложно достичь определенной цели.Поход к озеру Лун, спрятанному в Национальном лесу Пайетт к северу от Макколла, у подножия горы Норт Лун, представляет собой легкий (но длительный) семейный поход, который привлекает туристов с маленькими детьми.
Но бомбардировщик находится на другой стороне озера, откуда вы прилетите, и нет официальной дороги, чтобы добраться до него. Озеро Лун находится в рекомендованной Сечешем дикой местности, поэтому сохранение чувства исследования является частью плана управления.
«Мы стараемся во многом поощрять самостоятельность и позволяем людям иметь свои собственные риски и проблемы, чтобы путешествовать по ландшафту», — сказала Сьюзан Дженкинс, менеджер программы отдыха в районах рейнджеров Макколл и Нью-Медоуз на Пайетте.
Есть предложение добавить официальный след на сайт, но неясно, поможет ли это через процесс утверждения Лесной службы.Настоящая тропа позволит большему количеству людей познакомиться с уникальной историей Айдахо, но это также откроет сайт для еще большего вандализма и возможных грабежей.
«Моя последняя поездка по мониторингу была в августе прошлого года, — сказал Дженкинс. «Было много случаев вандализма с людьми, которые высекли свое имя на боку».
Поход к озеру Лун начинается у тропы за пределами кемпинга Чинук, что в 37 милях к северо-востоку от Макколла. К озеру ведут два ухоженных маршрута, которые дают возможность пройти петлю вместо выхода и обратно.Засаженная деревьями западная сторона находится в 4,6 милях от озера с 540 футами высоты над уровнем моря. Тропа каньона на восточной стороне составляет 5,7 миль с увеличением высоты около 450 футов.
Виды на два маршрута совершенно разные. Оба открыты для горных велосипедов, лошадей и мотоциклов.
«Это великолепный поход, — сказал Дженкинс, — и он открыт для самых разных пользователей. … По моему опыту, это относительно легкий поход с точки зрения набора высоты и потери «.
Путь к озеру Лун относительно легкий 4.Поход длиной 6 миль (в одну сторону) с частыми видами на гору Норт-Лун вдалеке. Chadd Cripe [email protected]Моя группа выбрала более короткий маршрут к озеру Лун по пути внутрь, сохранив возможность более короткого похода, если это необходимо. Большая часть подъемов происходит на первой миле.После преодоления шока от выхода из машины и попадания прямо в гору прогулка к озеру, казалось, прошла быстро. Вид на гору Норт-Лун дает представление о том, чего ожидать на озере.
Само озеро Лун — потрясающее место. Если бы вы только пошли туда пешком, вы были бы довольны.
Озеро Лун — одно из самых популярных мест для пеших прогулок в национальном лесу Пайетт.
Чадд Крип ccripe @ idahostatesman.comНо если вы хотите увидеть бомбардировщик, самое время принять решение на озере. Самый короткий путь — перейти через Лун-Крик на северном берегу (для этой цели мы взяли с собой водные ботинки) и проехать около 0,8 мили вдоль берега до бомбардировщика. Но упавшие деревья, валуны и сырая земля были такими медведями, что один из членов нашей группы решил прогуляться по озеру. Мой 10-летний сын падал по пояс, так что у нас это не сработало.Мы боролись с камнями и бревнами и, в конце концов, победили. Это заняло почти час, отчасти потому, что мы не знали, куда идем. Это была любимая часть похода Оливера; это было моим наименее любимым.
Другой вариант — отправиться по тропе Утиного озера вдоль западного берега и проехать около 0,4 мили оттуда до бомбардировщика. Но в целом этот маршрут длиннее — 1,4 мили от перекрестка с Утиным озером до бомбардировщика. Кроме того, тропа была усеяна упавшими деревьями (там я получил худший срез за день), и нет никаких указателей, указывающих, где оставить тропу и поехать по пересеченной местности.
Если вы выберете этот маршрут — мы использовали его на выходе — вы пересечете ручей на южном конце озера. Вы можете проверить свой баланс на удачно поставленных бревнах или перейти вброд.
В любом случае цель стоит затраченных усилий.
Два поясняющих знака рассказывают историю B-23 Dragon, который разбился при возвращении с тренировок в Неваде на свою базу в Маккорд Филд в Такоме, штат Вашингтон. Бомбардировщик был построен в 1939 году с размахом крыла 92 фута и шириной 58 футов. стопа, общая длина 4 дюйма. Это был первый американский самолет с двумя боковыми наводчиками калибра .30 и хвостовым наводчиком калибра .50. Всего было изготовлено 38, и ни один из них не использовался в бою из-за быстрого развития военного флота.
Бомбардировщик Loon Lake разбился в январе.29 января 1943 года из-за снежной бури, которая привела к обледенению окон, потере радиосвязи и низкому уровню топлива, согласно исследованию Лесной службы. Лейтенант Роберт Орр попытался приземлиться у озера Лун, потому что оно выглядело как пустое поле, замерзшее и засыпанное снегом зимой, но самолет остановился на деревьях.
Экипаж построил навес и устроил пожар, используя бомбардировщик как часть укрытия, и позаботился об одном члене экипажа, у которого в результате крушения были сломаны кости.
Трое мужчин в конце концов отправились за помощью пешком — всего 35-40 миль по снегу за 15 дней.
Еще до того, как туристы вышли, через 16 дней после крушения, пилот отдаленной местности Пенн Стор заметил место крушения. Он вернулся, чтобы вывести пятерых мужчин. Через несколько дней трое туристов были спасены.
Позже, в 1943 году, офицер армии и сотрудники лесной службы вытащили 1200 фунтов оборудования с места крушения, согласно одному из толковательных знаков. Армия уничтожила летательные аппараты.
Один из членов экипажа, Эдвард Фриборг, написал книгу об испытании — «Катастрофа на холмах.Он был одним из тех, кто начал ходить пешком, сначала взобравшись на гребень.
«Холмы, холмы и другие холмы во всех направлениях», — писал он. «Поверьте, я твердо верил, что мы посмотрели в лицо смерти».
Дополнительная информация: Национальный лес Пайетт опубликовал обширную историю крушения и спасения в августе 2002 года. «Реальную историю бомбардировщика на озере Гагара» Ричарда Х. Холма-младшего можно найти в Интернете (поиск по запросу Бомбардировщик B-23 Loon Lake Forest Service).
Как добраться: Идите на север по Warren Wagon Road от Idaho 55 в McCall, следуя по западному берегу озера Payette.Через 28 миль асфальтированная дорога переходит в гравийную. Продолжайте движение еще 6,5 миль в сторону Secesh и поверните направо у указателя на Chinook Campground. Проехать чуть больше мили до тропы, которая находится за пределами кемпинга.
17 CFR § 240.12b-23 — Регистрация посредством ссылки. | CFR | Закон США
§ 240.12b-23 Регистрация путем ссылки.
(a) Заявление о регистрации или отчет. За исключением случаев, предусмотренных в этом разделе или в соответствующей форме, информация может быть включена посредством ссылки в ответ или частичный ответ на любой элемент заявления о регистрации или отчета.
(б) Финансовая информация. За исключением случаев, предусмотренных в правилах Комиссии, финансовая информация, которая должна быть предоставлена в сравнительной форме за два или более финансовых года или периодов, не должна включаться посредством ссылки, если только информация, включенная посредством ссылки, не включает весь период, для которого приводятся сравнительные данные. В финансовую отчетность не допускается включение посредством ссылки или перекрестных ссылок на информацию, не относящуюся к финансовой отчетности, если иное специально не разрешено или не требуется правилами Комиссии или U.S. Общепринятые принципы бухгалтерского учета или Международные стандарты финансовой отчетности, выпущенные Советом по международным стандартам бухгалтерского учета, в зависимости от того, что применимо.
(c) Экспонаты. Любой документ или его часть, поданные в Комиссию в соответствии с любым Актом, администрируемым Комиссией, могут быть включены посредством ссылки в качестве доказательства в любое заявление или отчет, поданный в Комиссию тем же или любым другим лицом.
Любой документ или его часть, поданные в обмен в соответствии с Законом, могут быть включены посредством ссылки в качестве доказательства любого заявления или отчета, поданного в обмен тем же или любым другим лицом.Если какое-либо изменение произошло в тексте любого документа, включенного посредством ссылки с момента его подачи, регистрант должен подать со ссылкой заявление, содержащее текст любого такого изменения и дату его.
(d) Гиперссылки. Вы должны включить активную гиперссылку на информацию, включенную в заявление о регистрации или отчет посредством ссылки, если такая информация общедоступна в Системе электронного сбора, анализа и поиска данных Комиссии («EDGAR») на момент подачи заявления или формы регистрации.Для гиперссылки на экспонаты см. Пункт 601 Положения S-K (§ 229.601 данной главы) или соответствующую форму.
(e) Общие. Включите прямое заявление, четко описывающее конкретное местоположение информации, которую вы включаете посредством ссылки. В заявлении должен быть указан документ, в котором информация была изначально подана или представлена, и расположение информации в этом документе.
Заявление должно быть сделано в том конкретном месте, где требуется информация, если применимо.Информацию нельзя включать в качестве ссылки в любом случае, если такое включение сделает раскрытие неполным, неясным или запутанным. Например, если явно не разрешено или не требуется, раскрытие не должно включаться посредством ссылки из второго документа, если этот второй документ включает информацию, относящуюся к такому раскрытию, посредством ссылки на третий документ.
FAPG 23 CFR 637B, Процедуры обеспечения качества для строительства
FHWA — FAPG 23 CFR 637B, Процедуры обеспечения качества для строительства РУКОВОДСТВО ПО ФЕДЕРАЛЬНОЙ ПОМОЩИ
5 октября 1995 г., пересылка 14
23 CFR 637B
OPI: HNG-23
ПОДРАЗДЕЛ G — ТЕХНИЧЕСКИЕ И ДВИЖНЫЕ ОПЕРАЦИИ
ЧАСТЬ 637 — КОНТРОЛЬ И РАЗРЕШЕНИЕ НА СТРОИТЕЛЬСТВО
Подчасть A — [Зарезервировано]
Подраздел B — Процедуры обеспечения качества строительства
п.
637.201 Назначение.
637.203 Определения.
637.205 Политика.
637.207 Программа обеспечения качества.
637.209 Квалификация персонала лабораторий, отборов проб и испытаний.
Приложение A к подразделу B-Guide Письмо о сертификации государственного инженера
Орган: 23 U.S.C. 109, 114 и 315; 49 Свода федеральных правил 1.48 (b).
Источник: 51 FR 40417, 7 ноября 1986 г., если не указано иное.
Подчасть A- [Зарезервировано]
Подраздел B — Процедуры обеспечения качества строительства
п. 637.201 Цель.
Чтобы прописать политику, процедуры и руководящие принципы для обеспечения качества материалы и строительство во всех проектах федеральной автострады в Национальной системе автомобильных дорог
п. 637.203 Определения.
(а) Приемочная программа. Все факторы, составляющие государственную магистраль
определение агентством (SHA) качества продукта, как указано в
требования контракта.
Эти факторы включают контрольный отбор, тестирование,
и инспекции и могут включать результаты отбора проб и испытаний для контроля качества.
(b) Образцы и тесты для независимой проверки . Мероприятия, которые объективная и независимая оценка всех процедур отбора проб и тестирования используется в приемочной программе.Процедуры испытаний, используемые в программе приемки которые выполняются в центральной лаборатории SHA, не подпадают под действие программа независимого подтверждения.
(c) Образцы квалификации . Однородные образцы, которые распределяются и протестирован двумя или более лабораториями. Результаты теста сравниваются, чтобы убедиться что лаборатории получают такие же результаты.
(d) Квалифицированные лаборатории. Лаборатории, которые соответствуют определению соответствующие программы, установленные каждым SHA.Как минимум, квалификация программа должна включать положения о проверке испытательного оборудования и лаборатории должен вести записи калибровочных проверок.
(e) Квалифицированный персонал для отбора проб и тестирования . Персонал, способный как определено соответствующими программами, установленными каждым SHA.
(f) Обеспечение качества . Все эти запланированные и систематические действия необходимы чтобы обеспечить уверенность в том, что продукт или услуга будут удовлетворять заданным требованиям к качеству.
(ж) Контроль качества . Все методы работы подрядчика / поставщика и действия, которые выполняются или проводятся для выполнения требований контракта.
(h) Случайная выборка . Образец взят из партии, в которой каждое приращение в лоте имеет равную вероятность быть выбранным.
(I) Поставщик . Поставщик материалов, созданных в рамках проекта, но не подрядчик.
(j) Контрольный отбор и тестирование .Отбор образцов и тестирование проводятся для подтверждения качества продукта.
п. 637.205 Политика.
(a) Программа обеспечения качества . Каждый SHA должен разработать гарантии качества программа, которая гарантирует, что материалы и качество изготовления включены в каждый проект строительства автомагистрали федеральной помощи в NHS. с требованиями утвержденных планов и технических условий, в том числе одобрил изменения.Программа должна соответствовать критериям гл. 637.207, и быть одобренным FHWA.
(b) Возможности SHA . SHA должен поддерживать адекватный, квалифицированный персонал для администрирования его программы обеспечения качества. Государство также должно поддерживать центральная лаборатория. Центральная лаборатория государства должна соответствовать требованиям в гл. 637.209 (а) (2).
(c) Программа независимого подтверждения . Независимые контрольные образцы и испытания или другие процедуры должны выполняться квалифицированным отбором образцов и персонал по тестированию, нанятый SHA или его уполномоченным агентом.
(d) Контрольный отбор проб и испытания . Проверочная выборка и испытания должны выполняться квалифицированным испытательным персоналом, нанятым SHA или его назначенный агент, за исключением подрядчика и поставщика.
(e) Случайные выборки . Все пробы, используемые для контроля качества и проверки, отбора проб и испытаний должны быть случайными.
п. 637.207 Программа отбора проб и испытаний.
(a) Программа обеспечения качества каждого SHA должна предусматривать программу приемки и программу независимого обеспечения (IA), состоящую из следующего:
(1) Приемочная программа.
(I) Каждая программа приемки SHA должна состоять из следующего:
(A) Частотные графики для проверочного отбора проб и испытаний, которые даст общее руководство персоналу, ответственному за программу, и позволит адаптация к конкретным условиям и потребностям проекта.
(B) Идентификация конкретного места строительства или производства операция, при которой должны быть выполнены контрольный отбор образцов и испытания.Идентификация конкретных атрибутов для проверки, которые отражают качество готовой продукции.
(ii) Результаты отбора проб и испытаний для контроля качества могут использоваться как часть решения о приемке при условии, что:
(A) Отбор проб и тестирование проводились квалифицированными лабораториями и квалифицированным персоналом по отбору проб и тестированию.
(B) Качество материала подтверждено проверочными испытаниями. и отбор проб.Контрольный отбор образцов должен выполняться на образцах, которые берутся независимо от образцов для контроля качества.
(c) Отбор проб и тестирование для контроля качества оцениваются программой внутреннего аудита.
(iii) Если используются результаты отбора проб и тестирования для контроля качества В программе приемки SHA устанавливает систему разрешения споров. Система разрешения споров направлена на устранение несоответствий. происходит между проверочным отбором и тестированием и контролем качества отбор проб и тестирование.Система разрешения споров может полностью управляться в рамках SHA.
(2) Программа ВА должна оценивать квалифицированный персонал по отбору проб и тестированию. и испытательное оборудование. Программа должна охватывать процедуры отбора проб, испытания процедуры и испытательное оборудование. Каждая программа внутреннего аудита должна включать расписание частоты для оценки ВА. График может быть установлен на основе основа проекта или системная основа. Частота может быть основана на единицу продукции или единицу времени.
(I) Испытательное оборудование должно оцениваться с использованием одного или нескольких следующее: проверки калибровки, разделенные образцы или образцы для проверки квалификации.
(ii) Персонал, проводящий испытание, должен оцениваться путем наблюдений и разделения проб или образцов квалификации.
(iii) Результаты испытаний должны быть быстро сопоставлены и задокументированы. полученные от оцениваемого тестера и тестера IA. SHA должен разрабатывать руководящие принципы, включая пределы допуска для сравнения результатов испытаний.
(iv) Если SHA использует системный подход к программе IA, SHA должен: предоставлять ежегодный отчет в FHWA с обобщением результатов программы внутреннего аудита.
(3) Подготовка сертификата материалов, соответствующих по содержанию к Приложению A данного подраздела, должны быть представлены администратору отдела FHWA. для каждого строительного проекта, который подлежит надзору за строительством FHWA.
(b) [Зарезервировано]
п.637.209 Квалификация лабораторного и пробоотборного и испытательного персонала.
(а) Лаборатории.
(1) После 29 июня 2000 г. все тесты подрядчиков, поставщиков и SHA, используемые в решение о приемке должно быть выполнено квалифицированными лабораториями.
(2) После 30 июня 1997 г. центральная лаборатория каждого SHA должна быть аккредитована. Программой аккредитации AASHTO или аналогичной аккредитацией лаборатории Программа утверждена FHWA.
(3) После 29 июня 2000 г. любая лаборатория, не относящаяся к SHA, которая выполняет Отбор образцов и испытания IA должны быть аккредитованы при проведении испытаний. Программой аккредитации AASHTO или аналогичной аккредитацией лаборатории Программа утверждена FHWA.
(4) После 29 июня 2000 года любая лаборатория, не относящаяся к SHA, которая используется в споре Отбор проб и тестирование разрешения должны быть аккредитованы при проведении испытаний. Программой аккредитации AASHTO или аналогичной аккредитацией лаборатории Программа утверждена FHWA.
(b) Персонал по отбору проб и испытанию. После 29 июня 2000 г. все отборы проб и данные испытаний, которые будут использоваться при принятии решения о приемке или программе внутреннего аудита, должны выполняться квалифицированным персоналом по отбору проб и тестированию.
(c) Конфликт интересов. Во избежание появления конфликта представляет интерес, любая квалифицированная лаборатория, не относящаяся к SHA, должна выполнять только один из следующие виды тестирования в одном проекте: верификационное тестирование, качество контрольное тестирование, тестирование IA или тестирование разрешения споров.
Приложение A к подразделу B — Руководство штата о сертификации Инженер
Дата
№ пр.
Результаты испытаний, использованных в программе приемки, показывают, что материалы включены в строительные работы, а строительные операции контролируются путем отбора проб и испытаний соответствовали утвержденным планам и спецификациям. (Следующее предложение следует добавить, если частота тестирования IA основана на по проектным объемам.Все независимые контрольные образцы и тесты находятся в пределах пределы допусков образцов и испытаний, которые используются в программе приемки.)
Исключения из планов и спецификаций объяснены на обратной стороне документа. (или на прикрепленном листе).
Директор лаборатории SHA или другое соответствующее должностное лицо SHA.
Главная | Директивы | 23 CFR TOC | Обратная связь Министерство транспорта США — Федеральное управление шоссейных дорог
границ | Аутофагия, индуцированная аутофагией, индуцированной ализолом A 24-ацетатом и ализолом B 23-ацетатом, опосредует апоптоз и нефротоксичность в клетках проксимальных канальцев почек человека
Введение
Нефротоксичность, необратимое повреждение почек, было вызвано лекарствами, продуктами питания или другими факторами.Медикаментозное поражение почек стало основной причиной нефротоксичности, которая привлекла большое внимание исследователей. Китайские травы, описываемые как искусственный интеллект медицинских практик с долгой историей использования, в значительной степени не регулировались без регистрации, мониторинга или проверки (Ikram et al., 2015; Stegelmeier et al., 2015). Нефропатия китайских трав (CHN), прогрессирующий почечный интерстициальный фиброз, первоначально была обнаружена после приема нефротоксических компонентов из китайских трав (Debelle et al., 2003). Нефротоксические препараты могут вызывать прямую токсичность для функции почек, и эта токсичность может зависеть от клинического контекста (Finlay et al., 2013). Хотя соответствующие исследования доказали, что около 50 китайских трав могут вызывать нефротоксичность, в том числе Aristolochia debilis Sieb. et Zucc. (Tsai et al., 2013), Tripterygium wilfordii Hook. f. (Li X.X. et al., 2015), A. manshuriensis Kom. (Ding et al., 2005) и так далее. Однако было очень мало информации о нефротоксичности широко используемых китайских трав.
Аутофагия — это высококонсервативный физиологический процесс, связанный с удалением поврежденных или старых биологических макромолекул и органелл из цитоплазмы (Cui et al., 2015). Аутофагия сыграла важную роль в почках как палке о двух концах. Он может быть защитным и, следовательно, способствовать выживанию, или способствовать смерти по неапоптотическим или апоптотическим путям (Thévenod and Lee, 2015). Недавние исследования показали, что аутофагия представляет собой сложный процесс в почках, включая защитный эффект за счет контроля аутофагии в определенных пределах или повреждение, ведущее к нефротоксичности из-за чрезмерной экспрессии (Shao et al., 2014; Takabatake et al., 2014; Ван и Чой, 2014). В настоящее время роль аутофагии в патогенезе нефротоксичности остается неясной.
Rhizoma alismatis (RA), сушеные корневища Alisma orientalis (Sam.) Juzep. , известный как «Zexie» на китайском языке, обычно используется для лечения широкого спектра заболеваний (Li and Qu, 2012; Han et al., 2013; Liu et al., 2013; Xu et al., 2013; Chen et al., 2014; Feng et al., 2014; Song et al., 2014; Tian et al., 2014).Хотя Alisol C, 23-эпокси-ализол B и Alisol O были идентифицированы как нефротоксические компоненты RA, спор о нефротоксичности RA все еще оставался нерешенным (Zhao et al., 2011). Недавно Alisol B 23-ацетат, Alisol A 24-ацетат и Alisol B были идентифицированы как новые индукторы аутофагии, причем Alisol B является наиболее мощным природным компонентом при РА (Law et al., 2010). Ингибирующее действие RA на клетки OP9 опосредовано аутофагией за счет снижения экспрессии белков, связанных с аутофагией, включая Beclin-1 (Park et al., 2014). Следовательно, 23B и 24A (рис. 1A) могут принимать участие в формировании аутофагии, способствуя нефротоксичности.
РИСУНОК 1. 23B и 24A индуцировали регулируемую аутофагией нефротоксичность и апоптоз через сигнальный путь PI3K / Akt / mTOR. (A) Химическая структура 24A (1) и 23B (2). (24-ацетат ализола A: C 32 H 52 O 6 , молекулярная масса = 532,75; 23-ацетат ализола B: C 32 H 50 O 5 , молекулярная масса = 514.74). (B) Потенциальный механизм регулируемой аутофагией нефротоксичности и апоптоза через сигнальный путь PI3K / Akt / mTOR.
Здесь мы провели это исследование, чтобы изучить: (1) нефротоксичность 23B и 24A in vitro и in vivo ; (2) регуляция 23B и 24A апоптоза и аутофагии клеток HK-2; (3) вызвана ли возможная нефротоксичность и апоптоз 23B и 24A аутофагией; (4) эта аутофагия клеток HK-2 может быть связана с регуляцией 23B и 24A в сигнальном пути PI3K / Akt / mTOR (Рисунок 1B).
Материалы и методы
Химия и материалы
Трипсин предоставлен компанией KeyGEN Biotech Co., Ltd (Нанкин, Китай). Среда Игла, модифицированная Дульбекко (DMEM) -F12 (1: 1), с высоким содержанием глюкозы и фетальной бычьей сывороткой (FBS) была приобретена у Gibco / BRL (Гранд-Айленд, Нью-Йорк, Нью-Йорк, США). 3-4,5-диметил-2-тиазолил) -2,5-дифенил-2-H-тетразолий бромид (МТТ), диметилсульфоксид (ДМСО) и 3-метиладенин (3-МА) были предоставлены Sigma Chemical ( Сент-Луис, Миссури, США).24-ацетат ализола A (24A) и 23-ацетат ализола B (23B; чистота ≥95%) были приобретены у Tianjin Evans Science and Technology Co., Ltd (Тяньцзинь, Китай). Первичные и вторые антитела против LC3, Beclin-1, Bcl-2, Bcl-xl, кластерина, Kim-1, TFF-3 и β-актина были предоставлены Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Даллас, Техас, США). Раствор для окрашивания гематоксилин-эозином был предложен компанией Shanghai Yuanmu Biotechnology Co., Ltd (Шанхай, Китай). Наборы EliVision plus и DAB были предложены компанией MXB Biological Technology Co., Ltd (Фучжоу, Фуцзянь, Китай). Монофосфат калия, гидрофосфат динатрия, хлорид натрия и хлорид калия были получены от Nanjing Nanao Science and Technology Co., Ltd (Нанкин, Китай).
Эксперименты на животных
Все процедуры с животными были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных Академии китайской медицины провинции Цзянсу в соответствии с опубликованными руководящими принципами Национального института здравоохранения. Тридцать самок крыс Sprague Dawley (SD) (180 ± 20 г) от SLAC Experiment Animals Co., Ltd (Шанхай, Китай). Перед экспериментом крыс обычно кормили диетой и дистиллированной водой ad libitum . Крысы были случайным образом разделены на 3 группы по 10 человек в каждой: крысам контрольной группы вводили желудочный зонд хлоридом натрия (10 мл / кг / день), крысам групп 23B и 24A вводили желудочный зонд 23B (0,4 г / кг / день) и 24A ( 0,5 г / кг / день) соответственно в течение 6 месяцев согласно нашему предварительному эксперименту (согласно предписаниям клиники максимальная доза РА составляет 45 г / кг / день для здоровых взрослых.Затем были рассчитаны дозы для животных с определенным нами содержанием 23B и 24A в провинции Фуцзянь.
H&E Окрашивание
После умерщвления крыс почки удаляли и немедленно фиксировали в растворе формалина. Почки заливали парафином, разрезали на срезы толщиной 5 мкм и окрашивали гематоксилин-эозином (H&E) (Kandemir et al., 2015). Срезы почек просматривали под микроскопом IX51 (Olympus Corporation, Япония).
Культура клеток
Линия клеток проксимальных канальцев почек человека (HK-2) была приобретена в Шанхайском институте биохимии и клеточной биологии (Шанхай, Китай).Клетки культивировали, как описано ранее (Gong and Hou, 2016), в среде DMEM-F12 (1: 1) с высоким содержанием глюкозы и 10% FBS, содержащей пенициллин (80 единиц / мл) и стрептомицин (0,08 мг / мл). Затем клетки помещали в инкубатор при 37 ° C с 5% CO 2 и среду необходимо заменять через день. После роста до 90% слияния клетки должны быть переварены 0,25% трипсином-0,02% ЭДТА для пассажа.
Анализ жизнеспособности клеток с помощью MTT
После 90% слияния клетки высевали в 96-луночные планшеты (5 × 10 3 клеток / лунку, 100 мкл).Клетки обрабатывали различными концентрациями 24A (768, 384, 192, 96, 48, 24, 12, 6, 3 мкМ) и 23B (960, 480, 240, 120, 60, 30, 15, 7,5, 3,25 мкМ). на 24 ч. Затем 100 мкл исходного раствора МТТ (5,0 мг / мл) добавляли в каждую лунку на 4 ч для образования пурпурных кристаллов формазана. В конце инкубации после удаления среды добавляли 100 мкл ДМСО на 10 мин микровибрации. Поглощение измеряли при 570 нм на считывающем устройстве для микропланшетов (Thermo, New York, NY, USA).
Проточная цитометрия
Апоптоз клеток анализировали путем окрашивания аннексином V и пропидиум йодидом (PI) с использованием проточной цитометрии (Peng et al., 2015) с помощью набора для анализа Annexin V-FITC / PI (Nanjing KeyGen Biotech, Nanjing, China) в соответствии с инструкциями производителя. FITC Annexin V и PI составляли 5 мкл соответственно, которые добавляли в последовательности для окрашивания клеток после трипсинизации, центрифугирования и ресуспендирования. После инкубации с окрашивающим раствором (аннексин V / PI = 1: 2) в течение 20 мин в темноте при комнатной температуре. Анализ сортировки активируемых флуоресценцией клеток (FACS) немедленно выполняли с использованием проточного цитометра (BD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния, США).
Просвечивающая электронная микроскопия (ПЭМ)
клеток HK-2 фиксировали и внедряли, как описано ранее (Lu et al., 2014). Клетки фиксировали 5% глутаровым альдегидом с последующей промывкой PBS (pH = 7,4). Затем клетки подвергали последующей фиксации в 1% осмиевой кислоте и окрашивали 2% уранилацетатом. Последовательно клетки обезвоживали 50, 70, 90 и 100% ацетоном и заключали в смолу EPON812. Образцы анализировали с помощью просвечивающего электронного микроскопа JEM-1010 (JEOL, Япония) при напряжении 100 кВ.
Иммунофлуоресцентный анализ
Иммунофлуоресцентный анализLC3 был проведен, как и в предыдущем исследовании (Kang et al., 2014). Клетки HK-2 выращивали на покровных стеклах в шестилуночных планшетах до 60% слияния, а затем обрабатывали 23B (15 мкМ) и 24A (6 мкМ) в течение 24 часов. После фиксации 4% параформальдегидом клетки пермеабилизировали с помощью PBS, содержащего 1% тритон-100. В качестве первичного и вторичного антитела использовали кроличьи антитела (1: 100) и козьи антитела против кроличьего IgG-FITC (1: 400), соответственно.Ядра метили раствором DAPI. Изображения получали с помощью флуоресцентного микроскопа IX51 (Olympus, Япония). Процент клеток HK-2, показывающих накопление LC3 puncta, количественно определяли с помощью программного обеспечения для анализа изображений Image-Pro Plus (Media Cybernetics, Rockville, MD, USA).
Иммуноцитохимический анализ
Клетки высевали на покровное стекло при начальной плотности 5 × 10 5 клеток / кусок и инкубировали в течение 24 часов перед добавлением 23B (15 мкМ) и 24A (6 мкМ).Затем клетки трипсинизировали, промывали PBS и фиксировали свежим 4% раствором параформальдегида. Для извлечения антигенов срезы нагревали в 10 мМ буферном растворе цитрата натрия (pH = 6,0) в течение 20 мин. Согласно эндогенной пероксидазе, слайды инкубировали в 0,3% H 2 O 2 метанола для уменьшения неспецифического фонового окрашивания. Последовательно клетки кипятили в цитратном буферном растворе в течение 10 мин. Их охлаждали, а затем промывали PBS перед нанесением блокирующей сыворотки.Первичные антитела (1: 200) инкубировали с клетками, а затем зондировали вторичным антителом. Для иммуноцитохимического окрашивания использовали двухэтапный метод Эливисона. Фотографии были собраны под микроскопом. Положительное выражение рассчитывали с помощью программного обеспечения для анализа изображений Image-Pro Plus (Media Cybernetics, Rockville, MD, США).
Вестерн-блоттинг
Уровни белка в клетках или почках определяли электрофорезом в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) в сочетании с вестерн-блоттингом.Вкратце, белки экстрагировали из тканевых гомогенатов или клеток, и равное количество общего белка отделяли с помощью 10% SDS-PAGE, а затем переносили из геля SDS-PAGE на PVDF-мембрану (Millipore, США). После блокирования 5% BSA в трис-буферном физиологическом растворе Tween-20 (TBST) мембраны инкубировали с первичными антителами в разведении 1: 500 в течение ночи. Затем мембрану промывали (трижды по 5 мин) и инкубировали со вторичным антителом (1: 1000) при 37 ° C в течение 30 мин. Блоты визуализировали с помощью реагента ECL-Plus (Санта-Круз, США) и анализировали с помощью программного обеспечения для анализа изображений Image Pro Plus (Media Cybernetics, Роквилл, Мэриленд, США).β-актин использовали в качестве контроля нагрузки.
Количественная ПЦР
Суммарную РНК клеток HK-2 экстрагировали реагентом TRIzol (Invitrogen, США). Затем он был подвергнут обратной транскрипции с помощью системы синтеза первой цепи SuperScript III для количественной полимеразной цепной реакции (q-PCR) в соответствии с указаниями производителя (Springen, Nanjing, China). Последовательности праймеров GAPDH, LC3, Beclin-1, Clusterin, Kim-1, TFF-3, Bcl-2 и Bcl-xl показаны в таблице 1. GAPDH использовался в качестве внутреннего стандарта.q-ПЦР проводили с помощью детектора последовательности ABI 7900 (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния, США) с использованием метода SYBR Green и d (N) шести случайных гексамеров с праймерами, приобретенными у Invitrogen (Карлсбад, Калифорния, США). Последовательно параметры термоциклирования составляли 95 ° C в течение 10 минут, 40 циклов при 95 ° C в течение 15 с и 60 ° C в течение 1 минуты. Образцы обрабатывали в трех экземплярах и нормализовали до 18S РНК. Изменения складок определяли методом DDCt.
ТАБЛИЦА 1. Последовательности праймеров, используемых для обнаружения мРНК.
Статистический анализ
Программное обеспечениеSPSS 16.0 использовали для расчета статистических различий между разными группами с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующим тестом Тьюки. Значения P меньше 0,05 считались статистически значимыми.
Результаты
23B и 24A влияют на жизнеспособность клеток и активируют апоптоз клеток
АнализМТТ использовали для оценки жизнеспособности клеток для скрининга оптимальной концентрации лекарственного средства 23B и 24A для клеток HK-2.Как показано на рисунке 2A, для дальнейших экспериментов были выбраны 15 мкМ 23B (жизнеспособность клеток: 96,69 ± 14,74%) и 6 мкМ 24A (жизнеспособность клеток: 96,20 ± 13,94%), при этом жизнеспособность клеток была выше 95%.
РИСУНОК 2. Экспрессия белка, связанного с апоптозом, в клетках HK-2, обработанных 23B и 24A. (A) Жизнеспособность клеток 23B и 24A в различных концентрациях. Данные выражены в виде средних значений ± стандартное отклонение, n = 6. (B) Клетки обрабатывали 23B и 24A, и апоптоз клеток анализировали с помощью проточной цитометрии. (C) Клетки обрабатывали 23B и 24A, и уровни белка анализировали вестерн-блоттингом. Экспрессию белков полуколичественно оценивали с помощью денситометрического анализа. (D) Иммуноцитохимический анализ экспрессии белка в клетках HK-2. Экспрессию белков полуколичественно оценивали с помощью денситометрического анализа. (E) Уровни мРНК Bcl-2 и Bcl-xl. Все эксперименты повторяли не менее трех раз. Данные были представлены как среднее значение ± стандартное отклонение ( n = 3). ∗ p <0.05, контрольная группа против группы 23B, контрольная группа против группы 24A.
Апоптоз клеток оценивали с помощью двойного окрашивания аннексином V и PI с помощью проточной цитометрии. Как показано на Фигуре 2B, обработка 23B (15 мкМ) и 24A (6 мкМ) значительно увеличивала апоптоз клеток HK-2 ( P <0,05) по сравнению с контрольной пустой группой. Кроме того, чтобы дополнительно подтвердить апоптоз клеток, индуцированный 23B и 24A, использовали вестерн-блоттинг и иммуноцитохимический анализ для определения экспрессии белков Bcl-2 и Bcl-xl в клетках HK-2 (Фигуры 2C, D).По сравнению с контрольной пустой группой, экспрессия антиапоптотических Bcl-2 и Bcl-xl была значительно снижена при вмешательстве с 23B и 24A ( P <0,05). Более того, уровни мРНК Bcl-2 и Bcl-xl были значительно снижены ( P <0,05) по сравнению с контрольной пустой группой (рис. 2E). Таким образом, результаты показали, что 23B и 24A могут запускать апоптоз в клетках HK-2 посредством подавления экспрессии Bcl-2 и Bcl-xl.
Предположение о нефротоксичности, вызванной 23B и 24A
In vitro и In vivoВ этом исследовании мы изучили, индуцируется ли нефротоксичность 23B и 24A in vitro и in vivo . In vitro , мы использовали клетки HK-2 для объяснения вызванной 23B и 24A нефротоксичности, вестерн-блоттинг и иммуноцитохимический анализ были использованы для определения экспрессии белков Kim-1, кластерина и TFF-3 в клетках HK-2 (рисунки 3A). , Б). По сравнению с контрольной пустой группой, экспрессия Kim-1, кластерина и TFF-3 была значительно увеличена при обработке 23B и 24A ( P <0,05). Для дальнейшей оценки нефротоксичности также использовали q-ПЦР для определения уровня мРНК Kim-1, кластерина и TFF-3.Как показано на фиг. 3C, уровни мРНК Kim-1, кластерина и TFF-3 были значительно увеличены при воздействии 23B и 24A по сравнению с контрольной пустой группой ( P <0,05).
РИСУНОК 3. Определение экспрессии белка, связанного с нефротоксичностью, на основе клеток HK-2. (A) Клетки обрабатывали 23B и 24A, и уровни белка анализировали вестерн-блоттингом. Экспрессию белков полуколичественно оценивали с помощью денситометрического анализа. (B) Иммуноцитохимический анализ экспрессии белка в клетках HK-2.Экспрессию белков полуколичественно оценивали с помощью денситометрического анализа. (C) Уровни мРНК Kim-1, кластерина и TFF-3. Данные выражены в виде средних значений ± стандартное отклонение, n = 3. * p <0,05, контрольная группа против группы 23B, контрольная группа против группы 24A.
In vivo патологических изменений почек у крыс выявлено не было. Как показано на фиг. 4A, интерстициальное воспаление, отшелушивание эпителиальных клеток почечных канальцев и морфологические изменения наблюдались в почках крыс, обработанных 23B или 24A.Вестерн-блоттинг также использовали для определения экспрессии белков Kim-1, кластерина и TFF-3 в почках крыс. Мы также обнаружили, что экспрессия белков Kim-1, кластерина и TFF-3 была значительно увеличена при обработке 23B и 24A в почках крыс по сравнению с контрольной пустой группой ( P <0,05, фиг. 4B).
РИСУНОК 4. Исследование нефротоксичности, вызванной 23B и 24A, у крыс. (A) Окрашивание HE почки крысы после 6 месяцев лечения лекарственными препаратами, патологические изменения показаны черными стрелками. (B) Уровни белка в почках крысы анализировали вестерн-блоттингом. Экспрессию белков полуколичественно оценивали с помощью денситометрического анализа. Данные выражены в виде средних значений ± стандартное отклонение, n = 3. * p <0,05, контрольная группа против группы 23B, контрольная группа против группы 24A.
Kim-1, кластерин и TFF-3 были важными биомаркерами нефротоксичности, вызванной лекарственными средствами, признанными Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA), Европейским агентством по оценке лекарственных средств (EMEA) и Институтом критического пути, Консорциумом по прогнозированию безопасности (C -Path PSTC) (Yu et al., 2013). Сообщается, что они могут защищать клетки HK-2 от апоптоза при нефротоксичности, вызванной лекарствами, для раннего обнаружения (Khan and Pandey, 2014; Mohamed et al., 2015). Прежде всего, основываясь на повышающей экспрессии Kim-1, Clusterin и TFF-3, мы предположили, что 23B и 24A могут вызывать нефротоксичность, сопровождаемую апоптозом клеток.
Формирование клеток HK-2, индуцированное 23B и 24A
23B и 24A были идентифицированы как индукторы аутофагии в предыдущем исследовании (Law et al., 2010). Ультраструктуру клеток HK-2 анализировали с помощью ПЭМ, чтобы показать образование аутофагии. Многочисленные аутофагосомы, характеризующиеся двойной мембранной структурой, наблюдались в клетках, обработанных 23B (15 мкМ) и 24A (6 мкМ), а также наблюдались аутофагические вакуоли, содержащие деградированные органеллы (рис. 5A). Кроме того, на Фигуре 5A представлены изображения иммунофлуоресценции клеток HK-2, инкубированных с 23B и 24A. Значительно более высокая зеленая флуоресценция была видна внутри клеток после 24 ч инкубации с 23B (15 мкМ) и 24A (6 мкМ), что указывает на увеличение LC3II.Количественная экспрессия LC3II была показана на Фигуре 5A, значительное увеличение количества LC3II было показано после 24-часовой обработки 23B и 24A ( P <0,05). Результаты показали, что 23B и 24A могут вызывать аутофагию клеток HK-2.
РИСУНОК 5. 23B и 24A способствовали формированию аутофагии. (A) 23B и 24A вызывают образование аутофагии. Ультраструктуру клеток HK-2 анализировали с помощью ТЕМ и иммунофлуоресцентного окрашивания LC3II.Аутофагосомы, автолизосомы или поглощенные органеллы показаны красными стрелками. Полуколичественную оценку экспрессии LC3II проводили денситометрическим анализом. (B) Клетки обрабатывали 23B и 24A, и уровни белка анализировали вестерн-блоттингом. Экспрессию белков полуколичественно оценивали с помощью денситометрического анализа. (C) Иммуноцитохимический анализ экспрессии белка в клетках HK-2. Экспрессию белков полуколичественно оценивали с помощью денситометрического анализа. (D) Уровни мРНК LC3 и Beclin-1.Все эксперименты повторяли не менее трех раз. Данные были представлены как среднее значение ± стандартное отклонение ( n = 3). * p <0,05, контрольная группа по сравнению с группой 23B, контрольная группа по сравнению с группой 24A.
Для дальнейшей идентификации аутофагии, индуцированной 23B и 24A, также использовали вестерн-блоттинг и иммуноцитохимический анализ. Соотношение LC3II / LC3I и Beclin-1 были выбраны для иллюстрации образования аутофагии. Как показано на фиг. 5B, C, соотношение LC3II / LC3I и экспрессия Beclin-1 в клетках, обработанных 23B (15 мкМ) и 24A (6 мкМ), были значительно увеличены соответственно ( P <0.05) по сравнению с контрольной пустой группой. Кроме того, q-PCR также использовалась для оценки аутофагии, вызванной 23B и 24A. Как показано на Фигуре 5D, в отличие от контрольной пустой группы, уровень мРНК LC3 и Beclin-1 в обработанных 23B (15 мкМ) и 24A (6 мкМ) клетках HK-2 был значительно увеличен, соответственно ( P <0,05). Приведенные выше результаты дополнительно иллюстрируют, что 23B и 24A могут индуцировать аутофагию в клетках HK-2 посредством регулирования уровня LC3 и Beclin-1.
Активация аутофагии опосредует нефротоксичность и апоптоз через путь PI3K / AKT / mTOR в клетках HK-2
Чтобы проверить, связаны ли нефротоксичность и апоптоз с аутофагией, обработанные 23B и 24A клетки HK-2 совместно инкубировали в течение 48 часов с 3-MA, неспецифическим ингибитором аутофагии.Эта обработка привела к 49,65 ± 2,63 и 50,71 ± 3,47% жизнеспособности клеток, обработанных 23B и 24A, в то время как жизнеспособность 87,30 ± 3,17 и 89,06 ± 3,03% после совместной инкубации с 3-МА (рис. 6А). Результаты показали, что подавление аутофагии, индуцированной 23B и 24A, с помощью универсального ингибитора может эффективно обратить вспять апоптоз клеток.
РИСУНОК 6. Экспрессия белка в клетках HK-2, обработанных 23B и 24A. (A) Жизнеспособность клеток HK-2, инкубированных с ингибитором аутофагии.Данные выражены в виде средних значений ± стандартное отклонение, n = 6. * p <0,05, контрольная группа против группы 23B, контрольная группа против группы 24A; # p <0,05, группа 23B по сравнению с группой 23B + 3-MA; $ p <0,05, группа 24A по сравнению с группой 24A + 3-MA. (B) Клетки обрабатывали 23B и 24A, и уровни белка анализировали вестерн-блоттингом. Экспрессию белков полуколичественно оценивали с помощью денситометрического анализа. (C) Клетки, обработанные 23B и 24A, инкубировали совместно с 3-MA, и уровни белка анализировали вестерн-блоттингом.Экспрессию белков полуколичественно оценивали с помощью денситометрического анализа. Данные выражены в виде средних значений ± стандартное отклонение, n = 3. * p <0,05, контрольная группа против группы 23B, контрольная группа против группы 24A; # p <0,05, группа 23B по сравнению с группой 23B + 3-MA; $ p <0,05, группа 24A по сравнению с группой 24A + 3-MA.
Отношение LC3II / LC3I было значительно снижено в клетках HK-2, в которые вмешались 23B и 3-MA или 24A и 3-MA, за счет ингибирования превращения LC3II и дальнейшего ослабления апоптоза клеток за счет значительного увеличения экспрессии белка Bcl-2 ( П <0.05) при значительном снижении экспрессии белка Kim-1 для улучшения нефротоксичности ( P <0,05) (фиг. 6B) по сравнению с таковой в клетках HK-2, обработанных только 23B или 24A. Результаты показали, что общий ингибитор аутофагии может эффективно обратить вспять апоптоз и нефротоксичность клеток посредством ингибирования аутофагии, индуцированной 23B и 24A.
PI3K / Akt / mTOR, классический сигнальный путь аутофагии, играет важную роль в аутофагии. По сравнению с контрольной пустой группой уровни фосфорилирования PI3K, Akt и mTOR были значительно снижены после обработки 23B или 24A (фигура 6C).Наши результаты показали, что аутофагия, индуцированная 23B или 24A, может регулировать нефротоксичность и апоптоз путем ингибирования пути PI3K / AKT / mTOR в клетках HK-2, но подробный механизм все еще требует нашего дальнейшего изучения и сертификации.
Обсуждение
Аутофагия, как название клеточного самопереваривания, представляет собой клеточный путь, участвующий в деградации белков или органелл (Mizushima et al., 2008). Аутофагия включает аутофагосомы и аутолизосомы, в то время как формирование аутофагосом зависит от нескольких генов, таких как связанная с микротрубочками легкая цепь белка 1 3 (LC3), Beclin-1 и гены, связанные с аутофагией (Zhao et al., 2015). LC3, связанный с контролем удлинения аутофагосом, присутствует в LC3I при нормальных условиях, но рекрутируется на мембрану и взаимодействует с фосфатидилэтаноламином, превращаясь в LC3-II (Woo et al., 2016). Повышенные уровни LC3-II могут указывать на формирование аутофагии, что согласуется с нашими результатами. Комплекс, образованный путем соединения Beclin-1 с PI3K типа III, регулирует положение другого белка Atg в предшественнике аутофагии, который регулирует активность аутофагии (Wirth et al., 2013). Кроме того, экспрессия Beclin-1 повышалась за счет стимуляции возникновения аутофагии.
Аутофагия и апоптоз имеют сложное взаимодействие, которое может действовать скоординированным и кооперативным образом, вызывая гибель клеток с блокированием аутофагии или облегчая выполнение апоптотической гибели клеток (Oral et al., 2016). Апоптоз в основном характеризуется фрагментацией межнуклеосомной ДНК и в большинстве случаев активацией исполнительных / эффекторных каспаз, таких как Bcl-2, которые играют важную роль в инициации и поддержании апоптоза (Melo-Lima et al., 2015). Bcl-2 и Bcl-xl являются основными антиапоптотическими членами семейства Bcl-2. Интересно, что семейство Bcl-2 проявляет перекрестные свойства при апоптозе и аутофагии. В базальных условиях было обнаружено, что белки Bcl-2 конститутивно связаны с Beclin-1 и позволяют протекать только базальным уровням аутофагии (Oral et al., 2016). Диссоциация Beclin-1 от Bcl-2 может быть важным событием, позволяющим аутофагию, в то время как расщепление Beclin-1, опосредованное каспазой, может способствовать апоптозу (Morais et al., 2016). Функциональная связь между аутофагией и апоптозом сложна, и соответствующие молекулярные механизмы остаются неясными. В некоторых случаях аутофагия представляет собой стрессовую адаптацию, которая подавляет апоптоз и предотвращает гибель клеток (Sureshbabu et al., 2015). Тем не менее, результаты нашего исследования показали, что аутофагия может способствовать апоптозу и ускорять гибель клеток. 3-МА, ингибитор аутофагии, оказывал эффективное ингибирующее действие на аутофагию, обращая вспять апоптоз клеток.
Фосфатидилинозитол-3-киназа / протеинкиназа B / мишень рапамицина у млекопитающих (PI3K / Akt / mTOR) участвует в различных клеточных процессах от роста или выживания клеток до гибели клеток или апоптоза (Morgan et al., 2009). Фосфорилирование Akt, активируемое активацией PI3K и mTOR, может интегрировать восходящие активирующие сигналы посредством пути PI3K / Akt, ведущего к фосфорилированию и ингибированию аутофагии (Polivka and Janku, 2014). Доказательства того, что ингибирование передачи сигналов PI3K / Akt / mTOR ускоряет чрезмерную аутофагию, которая приводит к апоптозу, а ингибирование mTORC1 может возбуждать аутофагию поврежденных или токсичных белков, что приводит к гибели клеток из-за активности mTORC2 на Akt (Heras-Sandoval et al., 2014) . Более того, в нашем исследовании 23B и 24A индуцировали аутофагию посредством ингибирования сигнального пути PI3K / Akt / mTOR.
Почки — типичные органы, легко повреждаемые ксенобиотиками. Аутофагия активируется гипоксией и окислительным повреждением, большинство из которых участвует в патогенезе нефротоксичности (Kaushal and Shah, 2016). В наши дни Kim-1, кластерин и TFF-3 широко рекомендуются в качестве новых биомаркеров нефротоксичности, которые могут защитить апоптоз клеток, вызванный повреждением почек (Mizushima et al., 2008; Khan and Pandey, 2014). Kim-1 представляет собой трансмембранный гликопротеин первого типа, который не обнаруживается в нормальной ткани почек, но сильно активируется при остром повреждении почек (Nogare et al., 2015; Ян и др., 2015). Кластерин представляет собой гликопротеин с немного повсеместным распределением в тканях и очевидным участием в биологических процессах (García-Martínez et al., 2012). Кластерин не обнаруживается в здоровой зрелой почке, но его экспрессия будет повышаться при повреждении почечных канальцев и различных заболеваниях почек (Li J.Y. et al., 2015). TFF-3, называемый кишечным фактором трилистника или Itf, представляет собой пептид, который находится преимущественно в желудочно-кишечном тракте и в сыворотке крови (Ge et al., 2015).Увеличение TFF-3 может секретироваться эпителиальными клетками почечных канальцев в поврежденных почках (Yu et al., 2010; Du et al., 2013). В настоящем исследовании нефротоксичность, вызванная 23B или 24A, оценивалась с помощью Kim-1, кластерина и TFF-3, которые были новыми биомаркерами для быстрого и чувствительного определения нефротоксичности и отличались от азота мочевины крови (BUN) и креатинина сыворотки (Scr).
Все больше внимания уделяется безопасности лекарственных растений в клинике. Однако на него повлияли многие факторы, такие как диатез тела, нерациональное лечение, длительное лечение, высокие дозы лекарств и так далее.Самая главная причина — недостаточная осведомленность о безопасности употребления наркотиков. Кроме того, с развитием фармацевтических технологий компоненты препаратов традиционной китайской медицины стали чище и чище, что повысило риск токсичности. В этом исследовании мы обнаружили, что 23B и 24A могут вызывать нефротоксичность, но нет сообщений о нефротоксичности при РА в клинике. Это может быть связано со следующими причинами. Во-первых, 23B и 24A, основные компоненты при РА, могут вызывать нефротоксичность, которая не равна нефротоксичности при РА.Во-вторых, содержание РА в рецептах традиционной китайской медицины низкое. Например, процент RA составляет 12% в таблетках с шестью ингредиентами Rehmannia (Liu Wei Di Huang Wan на китайском языке). Согласно инструкции Six Ingredient Rehmannia Pill, здоровый взрослый ежедневно принимал только 1,08 г RA. Более того, содержание 23B и 24A в 1,08 г RA слишком мало, чтобы вызвать токсичность. В-третьих, ни РА, ни рецепты, содержащие РА, не достигают токсической дозы, воздействующей на организм человека. В-четвертых, основываясь на сетевой токсикологии, мы думаем, что может существовать определенный порог в регуляции аутофагии, включая защитную функцию в пределах порога, а также повреждения, приводящие к нефротоксичности из-за чрезмерной экспрессии аутофагии (рис. 7).Однако это требует интенсивного изучения. 23B и 24A являются основными компонентами RA, они могут накапливаться в организме человека после длительного использования. Нет сообщений о нефротоксичности РА, но мы должны использовать это рационально, чтобы повысить чувство безопасности при употреблении наркотиков.
РИСУНОК 7. Двойная функция аутофагии в почках.
В этом исследовании было доказано, что 23B или 24A запускают апоптоз и повреждают клетки HK-2. Более того, ингибитор аутофагии эффективно обращал вспять апоптоз и нефротоксичность клеток, индуцированные 23B и 24A.Таким образом, мы предположили, что это повреждение может быть достигнуто за счет запуска аутофагии в клетках HK-2 посредством ингибирования сигнального пути PI3K / Akt / mTOR. Однако некий механизм, существующий между аутофагией и нефротоксичностью, все еще требует дальнейшего изучения.
Авторские взносы
CW Анализ и интерпретация данных, написание рукописи. Л. М. Концепция и дизайн, сбор данных. HC Сбор данных, анализ и интерпретация данных. GW Анализ и интерпретация данных.БЖ и Ю.Л. Сбор данных, анализ и интерпретация данных, вычитка рукописи. YZ, DL и JW Разработка методологии, редакция рукописи. JC, NY и XH Техническая поддержка, анализ и интерпретация данных. JS, LC и XT Концепция и дизайн, интерпретация данных, редакция рукописи. XJ и LF Концепция и дизайн, авторский надзор, редакция рукописи. Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.
Финансирование
Эта работа была поддержана фондами провинции Цзянсу для проекта 333 (No.BRA5475), Фонд естественных наук Цзянсу (BK2012491) и финансовую поддержку Национального фонда естественных наук Китая (81603382).
Заявление о конфликте интересов
Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Благодарность
Авторы хотели бы поблагодарить членов Ключевой лаборатории новой системы доставки лекарств Китайской Материа Медика Академии традиционной китайской медицины провинции Цзянсу.
Список литературы
Чен Д.К., Фэн Ю.Л. и Линь Р.С. (2014). Мочегонное и антидиуретическое действие фракций корневища Alismatis. J. Ethnopharmacol. 157, 114–118. DOI: 10.1016 / j.jep.2014.09.022
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Цуй, Дж., Бай, X. Y., и Чен, X. М. (2015). Рапамицин защищает от вызванного гентамицином острого повреждения почек посредством аутофагии на моделях мини-свиней. Sci. Rep. 5, 1–17.DOI: 10.1038 / srep11256
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Дебелле, Ф., Нортье, Дж., И Ванхервегем, Дж. Л. (2003). Влияние дексфенфлурамина на нефротоксичность аристолоховой кислоты на крысиной модели нефропатии китайских трав. Arch. Toxicol. 77, 218–226. DOI: 10.1007 / s00204-003-0438-y
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Дин, X. С., Лян, А. Х., и Лю, Б. Ю. (2005). Нефротоксичность Arzstolochia manshuriensis и аристолохиновой кислоты у мышей. Чжун Чжун Яо За Чжи 30, 1019–1022.
Ду, Т. Ю., Ло, Х. М., и Чжан, Ю. (2013). Циркулирующий сывороточный фактор трилистника 3 (TFF3) резко увеличивается при хронической болезни почек. PLoS ONE 8: e80271. DOI: 10.1371 / journal.pone.0080271
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Фэн Ю. Л., Чен Х. и Линь Р. С. (2014). Мочегонное и антидиуретическое действие этанола и водных экстрактов корневища Alismatis. J. Ethnopharmacol. 154, 386–390. DOI: 10.1016 / j.jep.2014.04.017
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Финли С., Брей Б. и Джонс М. К. (2013). Выявление факторов риска, связанных с острым повреждением почек у пациентов, поступающих в отделения неотложной помощи. Clin. Med. 13, 233–238. DOI: 10.7861 / Clinmedicine.13-3-233
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Гарсиа-Мартинес, Х. Д., Тварихонавичуте, А., Мартинес-Субиела, С. (2012). Кластерин в моче как почечный маркер у собак. J. Vet. Диаг. Вкладывать деньги. 24, 301–306. DOI: 10.1177 / 1040638711435112
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ге, Х. Ф., Гарднер Дж. И Барибо Х. (2015). Фактор трилистника 3 (TFF3) регулируется приемом пищи, улучшает толерантность к глюкозе и вызывает муцинозную метаплазию. PLoS ONE 10: e0126924. DOI: 10.1371 / journal.pone.0126924
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Гонг, Q., и Хоу, Ф. (2016). Молчание рецептора ангиотензина II типа-1 ингибирует индуцированный высоким содержанием глюкозы эпителиально-мезенхимальный переход в эпителиальных клетках проксимальных канальцев почек человека посредством инактивации сигнального пути mTOR / p70S6K. Biochem. Биофиз. Res. Commun .. 469, 183–188. DOI: 10.1016 / j.bbrc.2015.11.092
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Хан, К. В., Квун, М. Дж., И Джу, М. (2013). Этаноловый экстракт Alismatis Rhizoma уменьшает острое воспаление легких, подавляя NF-kB и активируя Nrf2. J. Ethnopharmacol. 146, 402–410. DOI: 10.1016 / j.jep.2013.01.010
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Херас-Сандовал, Д., Перес-Рохас, Дж. М., и Педраса-Чаверри, Дж. (2014). Роль пути PI3K / AKT / mTOR в модуляции аутофагии и клиренсе белковых агрегатов при нейродегенерации. Cell. Сигнал. 26, 2694–2701. DOI: 10.1016 / j.cellsig.2014.08.019
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Икрам, Р.Р. Р., Гани, М. К. А., и Абдулла, Н. (2015). Анализ применения информатики здоровья в традиционной медицине: обзор четырех систем традиционной медицины. Внутр. J. Med. Поставить в известность. 84, 988–996. DOI: 10.1016 / j.ijmedinf.2015.05.007
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Кандемир Ф. М., Озкарака М. и Бензер Ф. (2015). Рутин ослабляет повреждение почек, вызванное гентамицином, за счет уменьшения окислительного стресса, воспаления, апоптоза и аутофагии у крыс. Ren. Неудача. 37, 518–525. DOI: 10.3109 / 0886022X.2015.1006100
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Канг, Ю.Л., Салим, М.А., и Ло, Х.К.В. (2014). Трегалоза, независимый от mTOR индуктор аутофагии, облегчает повреждение подоцитов человека после лечения пуромицином аминонуклеозидом. PLoS ONE 9: e113520. DOI: 10.1371 / journal.pone.0113520
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Каушал, Г.П., и Шах, С. В. (2016). Аутофагия при остром повреждении почек. Kidney Int. 4, 779–791.
Google Scholar
Ло, Б. Ю. К., Ван, М. Ф., и Ко, Б. С. Б. (2010). Ализол B, новый ингибитор Са2 + АТФазы саркоплазматического / эндоплазматического ретикулума, вызывает аутофагию, стресс эндоплазматического ретикулума и апоптоз. Мол. Рак Тер. 9, 718–730. DOI: 10.1158 / 1535-7163.MCT-09-0700
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Li, Q., и Ку, Х. Б. (2012). Исследование гипогликемической активности и метаболизма спиртового экстракта Alismatis Rhizoma. Фитотерапия 83, 1046–1053. DOI: 10.1016 / j.fitote.2012.05.009
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ли, X. X., Du, F. Y., и Xing, J. (2015). Исследование активных компонентов Tripterygium wilfordii , приводящих к его острой гепатотоксичности и нефротоксичности. J. Ethnopharmacol. 162, 238–243. DOI: 10.1016 / j.jep.2015.01.004
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Лю, Дж. П., Фэн, Л., и Ма, С. П. (2013). Нейропротекторный эффект отвара Liuwei Dihuang на когнитивную недостаточность диабетической энцефалопатии у крыс с диабетом, вызванным стрептозотоцином. J. Ethnopharmacol. 150, 371–381. DOI: 10.1016 / j.jep.2013.09.003
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Лу, Х., Чжан, X. Y., и Zhang, Q. (2014). Апоптоз и аутофагия, индуцированные андрографолидом натрия бисульфатом в эндотелиальных клетках проксимальных канальцев человека, представляют собой путь, опосредованный АФК. Environ. Toxicol. Pharmacol. 37, 718–728. DOI: 10.1016 / j.etap.2014.01.019
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Мело-Лима, С., Лопес, М. К., и Моллинедо, Ф. (2015). ERK1 / 2 действует как переключатель между некротической и апоптотической гибелью клеток в клетках глиобластомы, обработанных эфирным фосфолипидом эдельфозином. Pharmacol. Res. 9, 2–11. DOI: 10.1016 / j.phrs.2015.02.007
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Мохамед, Ф., Бакли, Н. А., Эндре, З. Х. (2015). Биомаркеры повреждения почек выявляют острое повреждение почек, но только функциональные маркеры позволяют прогнозировать смертность после приема параквата. Toxicol. Lett. 237, 140–150. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2015.06.008
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Мораис, Р. Д., Томе, Р. Г., Сантос, Х. Б., Баццоли, Н., и Риццо, Э. (2016). Связь между белками bcl-2, bax, беклин-1 и катепсином-D во время постовуляторной регрессии фолликулов в яичниках рыб. Териогенология 85, 1118–1131. DOI: 10.1016 / j.theriogenology.2015.11.024
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Морган Т. М., Корецкий Т. Д. и Кори Э. (2009). Таргетная терапия распространенного рака простаты: ингибирование пути PI3K / Akt / mTOR. Curr. Противораковые препараты. Targets 9, 237–249.
PubMed Аннотация | Google Scholar
Ногаре, А. Л., Веронезе, Ф. В., и Манфро, Р. К. (2015). Экспрессия молекулы-1 повреждения почек в трансплантатах почек человека с интерстициальным фиброзом и тубулярной атрофией. BMC Nephrol. 16:19. DOI: 10.1186 / s12882-015-0011-y
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Oral, O., Akkoc, Y., и Gozuacik, D. (2016). Физиологическое и патологическое значение молекулярного взаимодействия между аутофагией и апоптозом. Histol. Histopathol. 31, 479–498. DOI: 10.14670 / HH-11-714
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Парк, Ю. Дж., Ким, М. С., и Квон, К. Б. (2014).Этаноловый экстракт корневища Alismatis подавляет дифференцировку клеток OP9 в адипоцитах. Дополнение на основе доказательств. Альтернат. Med. 2014: 415097. DOI: 10.1155 / 2014/415097
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Пэн П. А., Ван Л. и Чжао Ю. Х. (2015). Валсартан защищает клетки HK-2 от апоптоза, вызванного контрастным веществом, путем ингибирования стресса эндоплазматического ретикулума. Cell Biol. Int. 39, 1408–1417. DOI: 10.1002 / cbin.10521
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Шао, Ф., Бай, X. Y., и Лю, Y. Q. (2014). Роль аутофагии в патогенезе заболеваний почек. Подбородок. J. Kidney Dis. Вкладывать деньги. 3, 268–271.
Сонг, К. В., Хуанг, X. Ф., и Лу, К. Г. (2014). Обоснованность гиполипидемического эффекта отвара Alismatis Rhizoma, формулы классической китайской медицины у мышей с гиперлипидемией, вызванной диетой с высоким содержанием жиров. Иран. J. Pharm. Res. 13, 641–649.
PubMed Аннотация | Google Scholar
Штегельмайер, Б.Л., Браун, А.У., Уэлч К. Д. (2015). Проблемы безопасности растительных продуктов и традиционных китайских лекарственных трав: алкалоидов дегидропирролизидина и аристолоховой кислоты. J. Appl. Toxicol. 35, 1433–1437. DOI: 10.1002 / jat.3192
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Сурешбабу А., Райтер С. В. и Чой М. Э. (2015). Окислительный стресс и аутофагия: важнейшие модуляторы повреждения почек. Редокс Биол. 4, 208–214. DOI: 10.1016 / j.redox.2015.01.001
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Тевенод, Ф., и Ли, В. К. (2015). Живи и дай умереть: роль аутофагии в нефротоксичности кадмия. Токсичные вещества. 3, 130–151.
Google Scholar
Тиан, Т., Чен, Х., Чжао, Ю. Ю. (2014). Традиционное использование, фитохимия, фармакология, токсикология и контроль качества Alisma orientale (Sam.) Juzep: Обзор. J. Ethnopharmacol. 158, 373–387. DOI: 10.1016 / j.jep.2014.10.061
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Цай, Д. М., Кан, Дж. Дж., И Ценг, Ю. Дж. (2013). Метаболомический анализ сложных китайских препаратов: примеры индуцированной нефротоксичности у мышей из серии препаратов, содержащих аристолоховую кислоту. Evid. На основе дополнения. Альтернат. Med. 2013: 263757. DOI: 10.1155 / 2013/263757
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Вирт, М., Иоахим, Дж., и Туз, С. А. (2013). Формирование аутофагосом — роль комплексов ULK1 и Beclin1-PI3KC3 в создании основы. Семин. Cancer Biol. 23, 301–309. DOI: 10.1016 / j.semcancer.2013.05.007
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ву, Дж. Й., Ким, Э. Ю., Чанг, С. Е. (2016). Легкая цепь 3 белка, ассоциированного с микротрубочками, участвует в меланогенезе посредством регуляции экспрессии MITF в меланоцитах. Sci. Реп. 6, 1–11. DOI: 10.1038 / srep19914
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Сюй В., Ли Т. и Хуанг М.К. (2013). Противораковое действие тритерпеноидов, выделенных из Alismatis Rhizoma, на клетки HepG2. Acta Pharmacol. 34, 16–17.
Google Scholar
Ю. М., Чжан С. К. и Ли З. Г. (2013). Прогресс исследования ранних биомаркеров при повреждении почек и их применение в раннем прогнозировании. Подбородок. Pharm. J. 48, 247–252.
Ю. Ю., Джин, Х., Герхольд, Д. Л. (2010). Биомаркеры в моче, фактор трилистника 3 и альбумин позволяют на ранней стадии выявить повреждение канальцев почек. Nat. Biotechnol. 28, 470–479. DOI: 10.1038 / NBT.1624
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Чжао, X., Лю, Г., и Цзи, Q. (2015). Лираглутид подавляет аутофагию и апоптоз, вызванные высоким содержанием глюкозы через GLP-1R в эпителиальных клетках почечных канальцев. Внутр. J. Mol. Med. 35, 684–692.DOI: 10.3892 / ijmm.2014.2052
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Чжао, X. П., Лу, Л., и Чжан, Б. Л. (2011). Исследование различения нефротоксических компонентов в зекси. Чжун Чжун Яо За Чжи 36, 758–761.
PubMed Аннотация | Google Scholar
Расположение оружейного отсека YF-23 было одним из лучших и одним из худших.
Продолжая серию статей об одном из самых загадочных, неправильно понятых и опережающих свое время самолетах в военной истории — YF-23 Black Widow от Northrop, проигравшем в соревновании Advanced Tactical Fighter (ATF), перед Lockheed YF-22 Lightning, мы переходим к следующему этапу. взгляните на его уникальную конфигурацию отсека для оружия.Как и многие другие вещи YF-23, эта функция имела большие потенциальные преимущества, но также представляла повышенный риск для развития ВВС США. В конце концов, это, скорее всего, повредило перспективам Northrop поставлять американские истребители для завоевания превосходства в воздухе 21-го века, и, возможно, в то время по уважительной причине, но сегодня уникальная конфигурация отсека вооружения YF-23 почти наверняка будет высоко оценена.
YF-22 и YF-23 использовали оружие совершенно по-разному.YF-22 отличался довольно простой конструкцией: неглубокий отсек для вооружения, охватывающий его нижнюю часть фюзеляжа, сконфигурированный так, чтобы нести четыре AIM-120 AMRAAMS, расположенных рядом друг с другом, и два небольших отсека, которые располагались по бокам талии самолета — как пояс стрелка Дикого Запада — для переноски пара более коротких дальнобойных AIM-9 Sidewinders.
USAF
участников ATF бок о бок над пустыней Мохаве.
Головки искателя на Sidewinders будут разворачиваться в потоке скольжения под углом, когда двери боковых отсеков открыты, прежде чем запираться и стрелять со своей монтажной планки по врагу.AIM-120 будут выбиты из подфюзеляжного отсека с помощью пневматической трапецеидальной вертикальной пусковой установки. У каждой ракеты была своя одна из них, и она могла быть запущена свободно независимо от статуса других ракет в отсеке.
США
F-22A с отсеком для вооружения. Обратите внимание на три пусковых эжектора, расположенные в главном отсеке вооружения. Каждый из них несет по одному AIM-120.
Окончательная производственная конфигурация F-22 Raptor будет содержать шесть AIM-120C AMRAAM внутри — обрезанные плавники этой новой модели AMRAAM, которая тайно разрабатывалась во время конкурса ATF, обеспечивали дополнительное пространство для двух дополнительных ракет, а также два sidewinders, как первоначально предполагалось.F-22 также может нести одну 1000-фунтовые бомбы GBU-32 JDAM или четыре бомбы малого диаметра GBU-39 и AIM-120 на отсек или шесть бомб малого диаметра на отсек без AIM-120, что дает Raptor ограниченный удар в стойке. возможность противостоять средним и средним укрепленным сооружениям, а также по более мелким целям.
USAF
Четыре SDB и один AIM-120 могут поместиться в каждый из основных отсеков вооружения F-22.
С другой стороны, YF-23 компанииNorthrop имел гораздо менее простую конфигурацию отсека для вооружения.Вместо неглубоких, в основном конформных отсеков у YF-23 была единственная, похожая на гроб, кавернозная полость для размещения оружия, которая выходила из-за кабины, обратно в область между широко разнесенными и очень уникальными воздухозаборниками. Отсек был закрыт двумя очень большими открывающимися наружу дверями, и внутренняя часть отсека была намного глубже, чем у YF-22, но в целом немного уже.
USAF
Самолет-демонстратор технологий был разработан так, чтобы теоретически нести в этом отсеке три AIM-120 и два AIM-9 — три AIM-120, установленных в шахматном порядке на трапециевидных пусковых установках, и два AIM-9, прикрепленных к дверям отсека.Я говорю условно, потому что пригодная для использования система запуска никогда не была установлена ни на одном из прототипов планера, хотя в некоторых отчетах говорится, что в отсеке самолета был установлен единственный приборный AIM-120 для проверки пригодности и, возможно, для измерения вибрации во время испытательного полета. С другой стороны, Lockheed YF-22 на самом деле испытал AIM-120 на этапе демонстрации, что даже не было частью требований ATF, но тем не менее было впечатляющим. Это также нарисовало картину того, что YF-22 был гораздо более зрелой конструкцией, чем предложение Northrop.
USAF
Lockheed YF-22 выполняет тестовый запуск AIM-120.
Большой и глубокий оружейный отсек отлично подходит для применений «воздух-земля», но создает потенциально нежелательные сложности для применений «воздух-воздух». Если ракеты располагаются друг над другом, это означает, что если одна из них заблокируется, то те, что за ней, будут непригодны для использования или того хуже. Это также означало, что потребуется продуманный механизм обращения с ракетами и запуска.Это может значительно увеличить вес и сложность конструкции и, таким образом, увеличить риски и, возможно, связанные с этим затраты. В то же время большой, глубокий, похожий на корыто оружейный отсек означал, что YF-23 потенциально мог нести значительные запасы «воздух-земля», в том числе оружие класса 2000 фунтов и, возможно, даже больше. Такой отсек также можно было разделить для одновременного ношения различных типов оружия меньшего размера.
YF-22 имел гораздо меньший потенциал класса «воздух-земля», но он также не имел никаких сложностей и недостатков, присущих отсеку вооружения YF-23, и для того, что должно было быть чистокровным истребителем класса «воздух-воздух», подобным которому мир никогда не видел, чтобы сделать ставку на возможности класса «воздух-земля», которые могут быть реализованы в один прекрасный день, не было в списке задач программы ATF.
USAF
Обратите внимание, что видны швы отсеков для оружия.
Окончательная конфигурация F-23 должна была заметно отличаться от его предшественника YF-23. В нем будет два отсека для оружия вместо одного. Такой же большой отсек примерно в том же месте, что и оригинал, но также еще один меньший, более мелкий отсек под кабиной, в котором можно было бы разместить пару AIM-9 Sidewinders.По большому счету, такая конфигурация позволила бы нести четыре или, может быть, пять AIM-120 и пару боковых обмоток, но некоторые утверждают, что сложные и сложные приспособления для перевозки AIM-120 могли резко увеличить это количество до восьми или даже 10 AIM-120. Опять же, это будет зависеть от складывания ракет в магазины или использования вращающейся пусковой установки, среди других концепций, на некоторые из которых Northrop получила патенты в конце 1980-х, когда шло соревнование ATF.
USPTO
Патент Northrop на магазин для вертикальных ракет для истребителей времен ATF.
Но любой из этих журналов мог оставить пилота F-23 без значительной части их арсенала, если бы ракета заклинила. А сложные системы транспортировки и развертывания оружия не идеальны для истребителя, который постоянно поворачивается под сокрушительной силой 9G, а во время жесткого маневрирования его ударяют и вибрируют, как отбойный молоток.
Как и многие другие вещи, YF-23, оглядываясь назад, представляет собой ATF, который мог нести разнообразную боевую нагрузку класса воздух-земля, включая боеприпасы, способные поражать крупные и хорошо укрепленные цели — и особенно истребитель с лучшей кинематической дальностью действия. , и низкие наблюдаемые (малозаметные) характеристики, чем даже у YF-22, сегодня были бы почти идеальным боевым самолетом. Фактически, конструкции, пугающе похожие на YF-23, продолжают преподносить как новый скачок в возможностях пилотируемых истребителей почти через три десятилетия после того, как YF-23 впервые поднялся в небо.
Скриншот через Youtube
Lockheed представила визуализацию самолета, который выглядит ужасно похожим на YF-23, в качестве примера истребителя 6-го поколения почти через 30 лет после того, как YF-23 проиграл своему собственному конкуренту YF-22 ATF. Подробнее об этом читайте здесь.
Несмотря на то, что YF-23, возможно, представлял собой большой эволюционный скачок в конструкции истребителей и имел даже больший потенциал для развития, чем его аналог, YF-22 был более безопасной ставкой, основанной на информации, доступной на момент принятия решения ATF.Другими словами, YF-22 был более зрелым, менее рискованным и полностью реализованным примером того, что Lockheed хотел воплотить в жизнь в форме F-22A, чем то, что представлял YF-23. Это был также более традиционный вариант, и все они сыграли важную роль в принятии окончательного решения ВВС США. Считалось, что их выбор в пользу Pratt & Whitney F119 вместо General Electric F120 был сделан на тех же основаниях.
Я не мог написать эту статью, не обсудив давние слухи о существовании регионального ударного самолета YF-23, в основном называемого F / B-23.Вскоре после завершения программы ATF начали распространяться разговоры о том, что ВВС США преследуют совершенно иную цель для конструкции YF-23 и технологии, которая использовалась для этого. Ходили даже разговоры о том, что один из демонстраторов технологии YF-23 ATF был снят с выставки для изучения, а его компоненты использовались в какой-то форме последующей программы.
Национальный музей ВВС США
PAV-1 и его экспериментальные двигатели F119 до восстановления на авиабазе Райт Паттерсон.
В середине 2000-х годов появились модели и изображения F / B-23. Конструкция, получившая название Rapid Theater Attack, представляла собой увеличенную и удлиненную версию YF-23 с местом для двух членов экипажа, с более традиционными выхлопными трубами и, предположительно, без отклоняемых сверхзвуковых воздухозаборников — особенностью, которая должна была появиться на серийных F-23A. также. Буквально, это была суперкруизирующая, глубоко проникающая, мощная ударная машина регионального дальнего боя, о которой многие из нас давно мечтали.Самолет, который обладает кратным боевым радиусом без дозаправки, характерным для тактических истребителей, и способен преодолевать относительно большие расстояния за короткие промежутки времени с помощью длительного суперкруиза.
Общественное достояние
В такой концепции был смысл тогда и до сих пор. А большой оружейный отсек YF-23, расширенный в этой удлиненной версии, мог нанести большой урон, который мог уничтожить даже глубоко засыпанные бункеры.Имейте в виду, что после того, как F-117 был списан в 2008 году, у Пентагона не было тактических самолетов, которые могли бы глубоко проникнуть в воздушное пространство противника и выпустить оружие класса 2000 фунтов. Только стратегический бомбардировщик B-2 сохранит эту способность до тех пор, пока через десять лет не вступит в строй F-35.
Нортроп Грумман
Билл Свитман, ранее известный как Aviation Week, отметил, что F / B-23 имел «10 000 фунтов».внутренняя бомбовая нагрузка, крейсерская скорость 1,6 Маха и боевой радиус без дозаправки 1250 морских миль ».
Все это происходило, когда ВВС США обдумывали создание FB-22 с аналогичными, хотя, вероятно, менее специализированными возможностями, как у YF-23, но у FB-22 было преимущество в использовании большей части инфраструктуры поддержки и производства F-22 . В итоге ВВС США отказались от обоих самолетов, хотя концепция, похоже, в последнее время возвращается в Японию и даже в США.С. присматривается к новому тяжелому истребителю, который сочетает в себе как лучшие характеристики F-35, так и улучшенный планер F-22.
Что касается F / B-23 или любого другого продукта YF-23, включая потенциальный вариант тактической разведки, нет никаких веских доказательств того, что что-либо подобное когда-либо существовало в прототипе, не говоря уже о боевой форме. Но кто знает, может быть, однажды мы узнаем, что YF-23 был переработан в определенных отношениях для глубоко засекреченной программы, но пока истребитель с серьезным бомбардировочным потенциалом остается тупиком в анналах истории военной авиации.
Связаться с автором: [email protected]
Не забудьте зарегистрироваться Ваша электронная почта .